Zhvillimi i një metode të tërthortë ELISA për zbulimin e antitrupave të koronavirusit IgG të sindromës akute të diarresë së derrit, bazuar në proteinën e spikes rekombinante

Coronavirus i sindromës akute të diarresë së derrit (SADS-CoV) është një koronavirus patogjen enterik i derrit i sapo zbuluar që mund të shkaktojë diarre ujore te derrat e porsalindur dhe të shkaktojë humbje të konsiderueshme ekonomike në industrinë e derrave.Aktualisht, nuk ka një metodë të përshtatshme serologjike për të vlerësuar efektivitetin e infeksionit dhe vaksinës SADS-CoV, kështu që ekziston një nevojë urgjente për të përdorur një analizë imunosorbente efektive të lidhur me enzimën (ELISA) për të kompensuar këtë mangësi.Këtu, një plazmid rekombinant që shpreh proteinën SADS-CoV spike (S) i shkrirë me domenin Fc të IgG-së njerëzore u ndërtua për të prodhuar bakulovirus rekombinant dhe u shpreh në qelizat HEK 293F.Proteina S-Fc pastrohet me rrëshirë të proteinës G dhe ruan reaktivitetin me antitrupat Fc kundër njeriut dhe anti-SADS-CoV.Pastaj proteina S-Fc u përdor për të zhvilluar ELISA indirekte (S-iELISA) dhe për të optimizuar kushtet e reagimit të S-iELISA.Si rezultat, duke analizuar vlerën OD450nm të 40 serumeve SADS-CoV negative të konfirmuara nga analiza e imunofluoreshencës (IFA) dhe Western blotting, vlera e ndërprerjes u përcaktua të ishte 0.3711.Koeficienti i variacionit (CV) i 6 serumeve SADS-CoV pozitive brenda dhe ndërmjet ekzekutimeve të S-iELISA ishin të gjitha më pak se 10%.Testi i ndër-reaktivitetit tregoi se S-iELISA nuk ka ndër-reaktivitet me serumet e tjera të virusit të derrit.Përveç kësaj, bazuar në zbulimin e 111 mostrave klinike të serumit, shkalla e përgjithshme e koincidencës së IFA dhe S-iELISA ishte 97.3%.Testi i neutralizimit të virusit me 7 vlera të ndryshme OD450nm të serumit tregoi se vlera OD450nm e zbuluar nga S-iELISA ishte në korrelacion pozitiv me testin e neutralizimit të virusit.Së fundi, S-iELISA u krye në 300 mostra serumi të fermës së derrave.Komitetet komerciale të enteroviruseve të tjerë të derrit treguan se normat pozitive të IgG të SADS-CoV, TGEV, PDCoV dhe PEDV ishin përkatësisht 81.7%, 54% dhe 65.3%., përkatësisht 6%.Rezultatet tregojnë se S-iELISA është specifik, i ndjeshëm dhe i riprodhueshëm dhe mund të përdoret për të zbuluar infeksionin SADS-CoV në industrinë e derrave.Ky artikull mbrohet nga e drejta e autorit.të gjitha të drejtat e rezervuara.